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浅谈细胞增殖检测的常用方法-高端医疗险知识人寿保险

发布时间：2022-12-04 00:30:31所属栏目：老年保险已帮助人编辑作者：保险资讯网

细胞增殖检测可以对细胞表面或细胞内特异性标志物进行多重检测和多参数分析，在细胞水平进行系统性定量检测，最后可直接获取细胞多维信息，接下来本文就向大家介绍细胞增殖检测的相关内容。

浅谈细胞增殖检测的常用方法

细胞增殖检测的常用方法主要有BrdU标记法：1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。4．甲醇/醋酸固定10min。5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。6．5％正常兔血清封闭。7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。

细胞增殖检测之结晶紫法

结晶紫法的过程主要包括：1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。

另外，细胞增殖检测还有一种方法为酸性磷酸酶法：1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/LPBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。3．37℃，孵育1～4h。4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照，以细胞数为X轴，光吸收度为Y轴，可作直线回归，可推算出每孔中的细胞。

通过以上的介绍，相信大家听完之后对细胞增殖检测更加了解了，希望能对大家有所帮助！